虎杖苷在小鼠冠状动脉缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制研究

丁娲1，沈艳霞2 ，王龙祥3

指导老师：董鸣

(1. 深圳大学临床医学12级；2. 深圳大学临床医学12级；3. 深圳大学临床医学12级)

    摘要：【立论依据】心脏冠状动脉阻塞，再灌注疗法，极易造成大量自由基产生、钙超载和心肌细胞凋亡等损害。减少心肌细胞再灌注后凋亡仍是治疗冠心病的首要任务。研究表明虎杖苷在缺血再灌注损伤中有增加NO含量，减少自由基损害、提高心功能的保护作用，但其具体机制不明。 RhoA/ROCK通路的激活是缺血再灌注损伤中参与细胞凋亡的机制之一。新近研究表明，生理状态下，血管紧张素受体Ⅱ2型（AT2R）可通过激活RhoA-Pser188抑制ROCK下游通路，达到保护细胞正常生理状态的作用。因此，我们提出，病理状态下，AT2R对ROCK通路的影响是什么？虎杖苷对心肌缺血再灌注（I/R）是否通过该通路起到保护作用？因此，该项目的研究为虎杖苷改善冠脉血流、提高心功能提供实验依据和理论基础。【设计思路】实验分为正常对照组，I/R组，单纯虎杖组和虎杖治疗组。通过观察不同时间节点：术后1小时，24小时和7天，通过心动超声及各种生化检测，研究缺血再灌注机制，并在此基础之上，研究虎杖对缺血再灌注的保护机制。【实验内容】 1 小鼠缺血再灌注（I/R）模型建立。2 TTC和evans blue染色，并检测凋亡。3 留取血清检测cTnT。4 留取蛋白检测ROCK激酶活性，RhoA-Pser188，AT2R。5 检测血清和组织中NOS、iNOS 活性及 NO 含量的测定。【材料】C57小鼠24只，小动物超声仪，小动物心电图测量仪和各种生化检测仪器。【可行性】深圳大学机能平台具备所有小动物心功能检测和生化指标检测仪器。【创新性】本项目首次提出虎杖苷通过AT2R磷酸化RhoA-Pser188位点，从而抑制ROCK-心肌细胞凋亡通路，深入阐明虎杖苷保护缺血再灌注损伤机制。本项目首次在整体动物模型基础上，研究中药单体虎杖苷对心脏缺血-再灌注的治疗作用，摸索治疗的最佳浓度和作用的时间窗，具有很好的新药开发和临床应用前景。其次，本项目围绕虎杖苷改善冠脉血流，从分子、细胞、组织及整体水平等多个层次对其作用机制展开深入的研究，有较大的基础理论价值。

指导老师简介：

董鸣 博士 副教授 2011年2月在香港中文大学内科学系心脏内科部门工作学习，并取得博士学位。以第一作者发表SCI 7篇。研究方向主要是动脉粥样硬化的临床及病理生理机制的研究，心衰的病理生理发生机制和治疗。