创新论坛
第二组：生化与分子生物学，细胞生物学，基础免疫学，遗传学
家蚕新过敏原的鉴定及其过敏机制的研究
作者：梁志林1 李平2
深圳大学 2013级 临床医学；2.深圳大学 2014级 药学
指导老师：陈献雄 刘志刚
深圳大学，深圳 518060
目的：家蚕是我国特色的过敏原和重要的经济昆虫，国内外的文献指出家蚕可导致严重的过敏性哮喘，食用蚕蛹也会引发严重的过敏性疾病，但目前国内外对于家蚕过敏原的报导较少，本研究目的是对家蚕蚕蛹粗提液蛋白进行分离，鉴定其过敏原性，并探索其诱发过敏反应的机制。方法：1、用双向电泳对家蚕蚕蛹蛋白进行分离；2、通过免疫印迹，筛选能和家蚕过敏患者血清中IgE结合的蛋白，进行质谱分析；3、将质谱结果与NCBI数据库进行对比分析，合成所得家蚕蚕蛹序列；4、原核表达合成的基因；5、运用生物信息学技术对6个重组蛋白的结构和潜在的T/B细胞表位进行预测和分析；6、免疫印迹、ELSIA检测重组蛋白的过敏原性；7、建立小鼠哮喘模型探究家蚕蚕蛹Thiol peroxiredoxin（TP）诱发过敏性哮喘的机理；8、利用流式细胞术和CCK8试剂盒等，研究TP如何调节macrophages和DCs细胞的功能，进而引发过敏。结果：1、通过双向电泳，发现了6个潜在的过敏原（gi|112983152、gi|290560816、gi|290563229、gi|112982996、gi|112983054、gi|512917985）；2、原核表达6个潜在过敏原，得到重组蛋白；3、用免疫印迹和ELISA分别鉴定得到的6个重组蛋白，免疫印迹结果显示5组重组蛋白可与病人血清IgE特异性结合(除热激蛋白20.4（gi|112983152）），ELISA结果显示TP与家蚕过敏病人IgE特异性结合能力较强；4、通过生物信息学工具，预测了6个重组蛋白的结构及其中5个具有过敏原性的重组蛋白的T/B细胞结合表位；5、建立小鼠哮喘模型，TP可明显诱导过敏性哮喘，且在支气管肺泡灌洗液和小鼠脾细胞中，IgE和IL-4水平明显升高，同时IFN-r的水平却无明显变化，说明TP是通过Th2通路诱发超敏反应；6、在体外细胞实验中，TP可在 BCL2和Caspase9通路上显著诱导巨噬细胞发生凋亡，通过热激反应验证TP主要是通过酶的作用去诱导凋亡，TP可通过TLR4导致DCs细胞的表面抗原CD80、CD40、CD83水平明显上升。结论：本研究成功表达并鉴定了5个家蚕蚕蛹新过敏原，其中TP是一个新的主要过敏原，可诱发过敏性哮喘，诱导macrophages的凋亡，调节DCs的功能。
学生简介：梁志林，深圳大学 2013级 临床医学（5年制）
李平，深圳大学 2014级 药学（4年制）
导师简介：陈献雄 女，南方医科大学预防医学专业硕士，现深圳大学医学院高级实验师，医学教学实验中心副主任，主要从事病原生物学和免疫学方面的研究，有多年组织辅导学生参赛经验。主持各级课题10余项，近年发表研究论文10多篇。
刘志刚：男，毕业于南京医科大学；现深圳大学二级教授，博导，领军学者，深圳市过敏反应与免疫学重点实验室主任。主要从事免疫学和过敏反应学基础与应用研究；主持国家863计划、国家自然科学基金、粤港关键领域突破项目等课题多项，获省科技进步一等奖2项，二等奖5项。近10年发表论文300余篇，SCI收录论文100余篇。
