人鼠嵌合型FZD7 knock in小鼠FZD7蛋白表达及FZD7多肽疫苗的抗肿瘤效应研究

孙浩彬  浦思嘉  黄嘉楠

指导老师：王晓梅  Christina C.N. WU

深圳大学，518060

立论依据 肿瘤干细胞是肿瘤复发和转移的关键，目前尚缺少靶向此类细胞的治疗药物。FZD7（Frizzled7）是肿瘤干细胞表面标志物，可激活Wnt信号通路，介导肿瘤的生长和迁移。本项目针对FZD7靶点制备免疫敏化抗肿瘤疫苗。设计思路  WB检测人鼠嵌合型FZD7 knock-in （KI）小鼠不同发育阶段FZD7动态表达；制备FZD7工程多肽，将免疫佐剂TRL7与FZD7多肽偶联，制备FZD7多肽免疫敏化疫苗；免疫FZD7 KI小鼠小鼠3次，间隔为两周，检测疫苗的体内外免疫应答效应；第3次免疫后第2天对模型小鼠进行荷瘤实验，并检测该疫苗的抑瘤效果及免疫毒性。实验内容 1、WB检测并分析FZD7 KI小鼠在出生0、3、7、14、28天十二种组织中FZD7蛋白的表达。2、确定FZD7抗原表位，构建蛋白表达载体，提纯基因工程FZD7蛋白。将免疫佐剂TRL7与FZD7蛋白偶联，制备FZD7-TRL7免疫敏化疫苗。3、体外免疫应答：取KI小鼠脾淋巴细胞，体外抗原刺激后检测炎性因子与细胞因子表达水平，验证免疫激活效应。4、抗肿瘤效应：FZD7-TRL7疫苗免疫KI小鼠3次，第3次免疫后第2天用FZD7⁺细胞接种小鼠。实时记录小鼠肿瘤各项指标，检测细胞因子等，确定体内免疫应答效应、靶向杀伤肿瘤效应。5、疫苗的免疫毒性检测：FZD7-TRL7疫苗分别免疫两周龄FZD7 KI小鼠和WT小鼠3次，间隔为两周，第3次免疫后第5天，分别检测两种小鼠及免疫器官指数、各组织切片等，观察免疫毒性效应。创新性 1.课题组具有FZD7基因的专利权，该疫苗研发具有原创性。2.本课题将TRL7与FZD7蛋白偶联，解决了FZD7在体内免疫原性弱，不易被免疫系统识别的问题。3.本实验采用人源化FZD7 KI小鼠模型，具有更高的临床参考价值。可行性 1.实验室已构建出人源化FZD7 KI的小鼠模型。2.前期实验制备出FZD7免疫敏化疫苗并证实嵌合型小鼠FZD7蛋白出生后呈现发育递减式表达，可用于荷瘤模型。3.实验室具备完成本项目的实验条件。